Bridged Nucleic Acid (BNA) 合成
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自然核酸在其化学结构中具有更高的自由度。这一特性对DNA-DNA和RNA-RNA双链形成(杂交)热力学上是不利的,并经常受到内、外核酸酶的降解。但对于高度敏感的基因定位应用来说,提高结合亲和力(杂交能力)仍是一个未解决的问题。
Bridged nucleic acid 2',4'-BNANC (2'-O,4'-aminoethylene bridged nucleic acid) 是一种含有N-O联接的六元环结构的化合物。这种新型核酸类似物可以被合成并嵌入到寡核苷酸中。与之前几代的限制性核酸(PNA & LNA)相比,BNA寡核苷酸对其互补链表现出明显更高的亲和力。其对核酸酶抵抗活性的超常水平的敏感性和特异性使BNA成为开发高价值检测系统和治疗产品的优越工具。
BNA寡核苷酸允许在引物和探针的设计中具有更大的灵活性。它们可以与DNA、RNA和其他核酸类似物混合,使用标准的磷酰胺合成化学。BNA寡核苷酸也可以很容易地用标准的寡核苷酸标签如DIG、荧光染料、生物素、氨链接剂等进行标记或修饰。
优势
- 与PNA & LNA相比,杂交的选择性和特异性得到改善
- 适用于检测短的RNA和DNA靶标
- 有助于Tm标准化
- 增加双链的热稳定性
- 增加三链的热稳定性
- 能够进行单核苷酸的区分
- 对外酶和内酶的抵抗导致在体内和体外应用的高生物稳定性
- 出色的反义抑制和效力
- 链入侵使得检测"难以接触"的样本成为可能
- 灵活的探针设计,不受GC含量的限制
- 易于适应多种DNA或RNA检测系统
应用
- 抗基因抑制
- Gapmer反义研究
- 体内、体外递送
- RNAi研究
- 抑制RNA功能
- 实时/ qPCR
- SNP检测/等位特异性PCR
- 原位杂交
- DNA酶和核糖酶
- 生物传感器
BNA单体可以与DNA、RNA和其他寡核苷酸混合,以促进Tm(熔融温度)的变化,同时不失去特异性。这一特性可以用于优化寡核苷酸的Tm,并可以在保持Tm的同时缩短探针设计。这在microRNA研究、PCR、微阵列和其他需要杂交灵敏度和特异性的应用中都是有益的。与其前身LNA不同,BNA具有更强的抗核酸酶性和更好的灵活性,这两者都允许有效的双链和三链形成。这使BNA寡核苷酸对ssRNA和dsDNA具有高的结合亲和力,并使BNA寡核苷酸成为体内应用的优秀工具。
由于增加了热双链稳定性和核酸酶抗性,更强的生物稳定性,是体内反义、siRNA应用的理想解决方案。上一代的2',4'-LNA没有足够的抗核酸酶性,也没有有效的三链形成所需的灵活性。BNA的增加双链和三链形成能力符合Watson-Crick结合,并使nBNATM寡核苷酸对ssRNA和dsDNA具有高的结合亲和力。这种侵入性质使BNATM成为体内应用的优秀工具。将BNA嵌入到寡核苷酸中,进一步增强了对核酸酶降解的抵抗性,并导致了高体外和体内的稳定性,使BNANC成为一个有前途的治疗剂。
多功能核酸类似物为灵活性和易用性提供了支持。 BNA的生理性质,如水溶性,与DNA和RNA非常相似。因此,BNA可以很容易地适应常规实验操作,嵌入到DNA/RNA寡核苷酸合成中,并在生化分析方法中使用。
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仅用于研究,不用于治疗人类或动物
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