研究数据

并非所有CRISPR文库都是一样的。我们的多向导sgRNA被设计用于靶向同一外显子，以诱导大片段缺失，相比单一sgRNA，这是最可靠的敲除策略。

在对32个基因靶点进行评估时，相对于单一sgRNA格式（69.6% KO分数），采用多向导格式引入的sgRNA显示出了更好的中位敲除效率，达到了89.9%的KO分数，提高了29.2%。

我们的多向导sgRNA在87.3%的时间内比单一sgRNA编辑产生了更高的插入/缺失频率。与多向导相关的高敲除效率并不仅仅是由于包含了一个表现优异的向导，而是由于三个向导共同作用。

多向导sgRNA具有更高的插入/缺失频率。使用多向导修饰的sgRNA（每个目标3个向导）相对于每个sgRNA单独编辑（左图）对基因进行靶向编辑更为高效。在一项更大规模的实验中，分析了针对100个随机选定的人类基因的300个独特的修饰sgRNA，这些sgRNA分别在单向导和多向导实验中进行了分析（右图）。多向导编辑导致的插入/缺失频率比单向导编辑高出87.3%，通常具有协同效应。这表明我们的多向导文库设计是进行功能丧失CRISPR筛选的最佳方法。

由多向导sgRNA驱动，我们的排列式CRISPR sgRNA文库在大量基因靶点上实现了持续高效的基因敲除效率。

多向导敲除策略实现高敲除得分。利用我们的多向导算法，在86个基因中，每个靶点最多转染3个修饰sgRNA（通过核转染）到U2OS-Cas9表达细胞系中。结果是77个基因的中位敲除得分为72.3%。由于测序错误，86个基因中有9个未能成功。