CRISPR Gene Knockout Kit 

常见的CRISPR基因敲除策略依赖于一个单一的单向导RNA（sgRNA），它产生随机的插入/缺失。由于可能发生的编辑种类繁多且不可预测，这种策略效率低下，通常无法生成功能性的基因敲除。

基因敲除试剂盒采用了一种专有的多向导策略，由最多三个空间协调的修饰SpCas9 sgRNA组成，可诱导片段缺失。借助Synthego的Halo平台提供动力的生物信息学设计工具，我们的设计工具生成了一个可靠地在首次尝试中敲除任何人类或小鼠编码蛋白基因的定制多向导sgRNA。

选择您感兴趣的基因，我们将合成您的高质量多向导SpCas9 sgRNA试剂盒！我们的基因敲除试剂盒保证适用于人类和小鼠（不包括非必要基因）。

每个试剂盒配有一个专门针对目标的多向导sgRNA管（每管最多3个sgRNA）。多向导sgRNA经过化学修饰，能够抵抗降解并防止触发细胞内免疫反应。为了获得最佳效果，可以添加转染优化试剂盒，以优化您的细胞类型。

由我们独特的多向导设计和高质量的合成sgRNA提供支持，我们的排列式CRISPR gRNA库由多孔板格式中的SpCas9 sgRNA组成，每孔靶向一个基因。向导序列基于专有的多向导RNA策略设计，通过生物信息学构建多达三个合成sgRNA，共同在靶基因中创建大片段缺失，从而增加功能性敲除的可能性，而不依赖于随机插入/缺失（indel）的产生。

总体而言，这减少了假阴性的可能性，可靠地敲除任何人类或小鼠蛋白质编码基因。我们的库也已准备好转染，可以复合成RNPs或直接转染到Cas9表达细胞系中，避免了漫长的准备过程。由于它们的排列格式，无需进行繁杂的下一代测序（NGS）数据解卷来解释结果。相反，您可以使用我们独特的生物信息学工具——CRISPR编辑推断（ICE），通过Sanger测序在几秒钟内分析您的CRISPR编辑。

结合化学和自动化，加上我们高质量的控制，我们将高质量的sgRNA高精度地放入每个孔中，使您能够自信地在筛选中可靠地敲除目标基因，我们对此有保证（不包括非必需基因）。由于我们优化的工作流程，我们可以在7天内以无与伦比的速度交付您的排列式CRISPR gRNA库。

凭借Synthego独家的生物信息学工具，我们的多向导设计由最多3个针对单个感兴趣基因的sgRNA组成。这些sgRNA是空间协调的，以诱导引导性修复，导致早期外显子中的片段删除，实现可靠的敲除。

Synthego的多向导sgRNA包括最多3个修饰的sgRNA（灰色条），它们针对单个感兴趣的基因。当共转染时，这些sgRNA在靶向基因组位点上创建并发的双链断裂（垂直虚线），从而导致一个或多个21+ bp的片段删除。

传统的sgRNA策略依赖于插入/缺失的生成，这并不总是能保证基因被敲除。Synthego的多向导策略可以保证100%在目标位点产生敲除，因此您可以对您的基因敲除有十足的信心。

在树突状细胞（通过核转染）中，比较了两种基因靶点（TNF、TLR4）的单向导与多向导sgRNA编辑。通过MiSeq对靶向位点进行测序分析编辑效率，并根据编辑类型（无插入/缺失、大片段删除≥50bp、小片段删除<50bp、插入）对测序结果进行分类。堆叠柱形图显示了分配给每种结果的读取序列的百分比。每个靶点的多向导sgRNA导致了大于75%的大片段删除结果。该研究由来自加州大学旧金山分校的Marco Jost博士和Jonathan Weissman博士，以及斯坦福大学的Amy Jacobson博士和Michael Fischbach博士进行。

在非克隆细胞系中，经过转染七天后，多向导sgRNA编辑引起的片段删除导致蛋白质敲除。

多向导sgRNA导致基因破坏和蛋白质表达丧失。左图：采用多向导方法编辑了三个基因（CDK9、CINP、COASY），结果显示敲除效率高，表现为敲除（KO）得分（表示导致假设敲除的序列百分比，包括片段删除和诱导移码插入）。右图：Western印迹显示相对于模拟处理的细胞（无sgRNA或Cas9），相应蛋白质的丧失。HEK293细胞通过核转染获得多向导sgRNAs。转染后七天，通过免疫印迹分析评估了细胞中蛋白质靶标的存在（同一时间段内GAPDH表达用于归一化）。

将您的CRISPR敲除策略升级至适用于任何人类或小鼠的蛋白编码基因。相较于依赖单个sgRNA产生敲除的策略，Synthego的多向导设计始终能够实现高敲除（KO）得分，使Gene Knockout Kit v2成为理想的敲除解决方案。

在对32个基因靶点进行评估时，以多向导引入的sgRNA相较于单个sgRNA，显示出29.2%更高的中位敲除效率（KO得分为89.9%，单个sgRNA为69.6%）。